পরীক্ষার আগে, সমস্ত বিকারক এবং নমুনাগুলি ঘরের তাপমাত্রায় ভারসাম্যপূর্ণ হওয়া উচিত; গলানোর পরে, নমুনাগুলি আবার সেন্ট্রিফিউজ করা উচিত এবং পরীক্ষার জন্য সুপারনেট্যান্ট নেওয়া উচিত; বিকারক বা নমুনা প্রস্তুতির জন্য, মিশ্রিত করুন এবং ফোমিং এড়ান; ক্রমাঙ্কন এবং নমুনা ডুপ্লিকেট পরীক্ষার জন্য সুপারিশ করা হয়.

1. ple যোগ করুন: পালাক্রমে প্রথম দুটি কূপে স্ট্যান্ডার্ড ওয়ার্কিং সলিউশন যোগ করুন এবং ওয়ার্কিং সল্যুশনের প্রতিটি ঘনত্বের জন্য দুটি গর্ত যোগ করুন, 100 μ প্রতিটি কূপের L. পরীক্ষিত নমুনা অন্যান্য কূপ যোগ করা হয়, 100 μ L প্রতি কূপ (পরীক্ষা সীমার উপরে নমুনা ঘনত্বের জন্য, নমুনা মান এবং নমুনা dilutions সঙ্গে পাতলা)। মাইক্রোপ্লেটটি ফিল্ম-কোটেড ছিল এবং 37 এ ইনকিউবেটেড ছিল ℃ 90 মিনিটের জন্য টিপ: মাইক্রোপ্লেটের নীচে নমুনা যোগ করার সময়, বুদবুদ তৈরি এড়াতে, গর্ত প্রাচীর স্পর্শ না করার চেষ্টা করুন, আলতো করে ঝাঁকান এবং মিশ্রিত করুন। অতিরিক্ত সময় 10 মিনিটের মধ্যে নিয়ন্ত্রণ করা উচিত।

2. বায়োটিনিলেটেড অ্যান্টিবডি/এন্টিজেন: তরলটি ফেলে দিন এবং না ধুয়ে শুকিয়ে নিন। 100 μL বায়োটিনিলেটেড অ্যান্টিবডি/অ্যান্টিজেন কার্যকরী দ্রবণ অবিলম্বে প্রতিটি কূপে যোগ করা হয়েছিল, মিশ্রিত, মাইক্রোপ্লেট প্লাস ফিল্ম-কোটেড, এবং 1 ঘন্টার জন্য 37℃ এ ইনকিউব করা হয়েছিল।

3. ধোয়া: গর্তে তরল ঝাঁকান, প্রতিটি কূপে 350 μL ওয়াশিং তরল যোগ করুন, 1-2 মিনিটের জন্য ভিজিয়ে রাখুন, মাইক্রোপ্লেটে তরলটি চুষুন বা ঝেড়ে ফেলুন এবং ঘন শোষক কাগজে শুকিয়ে দিন। এই ধোয়ার প্লেট ধাপটি 3 বার পুনরাবৃত্তি করুন। টিপ: ওয়াশিং মেশিন এখানে এবং অন্যান্য ওয়াশিং ধাপে ব্যবহার করা যেতে পারে। ধোয়ার প্রতিটি ধাপ পরীক্ষার জন্য অপরিহার্য।

4. এইচআরপি এনজাইম কনজুগেট: 100 μ এল এনজাইম কনজুগেট ওয়ার্কিং সলিউশন প্রতি কূপ, মিশ্রিত, ফিল্মের সাথে প্রলিপ্ত এবং 37 এ ইনকিউবেটেড ℃ 30 মিনিটের জন্য

5. ধোয়া: কূপের তরলটি ফেলে দিন এবং ধাপ 3 এর মতো একইভাবে 5 বার প্লেটটি ধুয়ে ফেলুন।

6. সাবস্ট্রেট: প্রতিটি কূপে 90 μL সাবস্ট্রেট দ্রবণ (TMB) যোগ করুন, ভালভাবে মিশ্রিত করুন, ফিল্ম আবরণ যোগ করুন এবং প্রায় 15 মিনিটের জন্য 37℃-এ ইনকিউবেট করুন। দ্রষ্টব্য: ইনকিউবেশন সময়টি প্রকৃত রঙের বিকাশের পরিস্থিতি অনুসারে সংক্ষিপ্ত বা বাড়ানো উচিত, তবে 30 মিনিটের বেশি নয়। স্ট্যান্ডার্ড হোলে একটি পরিষ্কার গ্রেডিয়েন্ট উপস্থিত হলে এটি বন্ধ করা যেতে পারে।

7. সমাপ্তি: 50 যোগ করুন μ প্রতিটি কূপের সমাপ্তি দ্রবণের L বিক্রিয়া শেষ করতে। দ্রষ্টব্য: সমাপ্তি সমাধানের সংযোজন ক্রমটি সাবস্ট্রেট সমাধানের মতোই হওয়া উচিত।

8. পড়ুন: অবিলম্বে একটি মাইক্রোপ্লেট রিডার দিয়ে 450 nm-এ প্রতিটি কূপের অপটিক্যাল ঘনত্ব (OD) পরিমাপ করুন। পরীক্ষা পদ্ধতি সেট আপ করার জন্য মাইক্রোপ্লেট রিডার আগে থেকেই খোলা উচিত।

9. পরীক্ষার পর, অব্যবহৃত রিএজেন্টটিকে নির্দিষ্ট স্টোরেজ তাপমাত্রা অনুসারে ফ্রিজে রেখে দিন যতক্ষণ না শেলফ লাইফ থাকে।